前言

抗體偶聯(lián)藥物（ADCs）在過去10年中取得了長足的進展，ADC是一種通過一個合理構建的連接子將細胞毒性小分子藥物偶聯(lián)到單克隆抗體上的復合物，可以向腫瘤內選擇性地輸送有效的細胞毒性藥物。

2009 年gemtuzumab ozogamicin （Mylotarg） 是美國食品和藥物管理 局（FDA）批準的第一個 ADC 藥物。目前，F(xiàn)DA 已經批準上市了 11 個 ADC藥物，還有上百個 ADC 藥物正處于臨床研究階段。            

ADC對于藥物靶點的選擇，除了首先要在腫瘤過度表達外，這些抗原的另一個重要因素是內吞的效率，這是藥物釋放活性所必需的。事實上，ADC的療效取決于靶向介導的內化在腫瘤細胞內傳遞有效載荷的效率。

ADC內化的途徑和效率，也與ADC藥物的療效和設計息息相關。因為它是連接子選擇可切割、不可切割或pH／還原敏感型的重要因素，以及有效載荷（或其活性代謝物）是否能夠在細胞膜上擴散以提供“旁觀者效應”，還有是否提高了腫瘤殺傷率或有助于劑量限制毒性。因此有必要深入了解ADC的內吞作用和機制，因為它是ADC在體內發(fā)揮藥效中極其重要的第一步。

ADC的相關內吞途徑

一般來說，正常的內吞作用可分為三個階段：（1）芽的形成，（2）膜的彎曲和囊泡的成熟，（3）膜的斷裂并釋放到細胞質中。多種內吞途徑有重疊的方面，因此內吞的一般過程是高度靈活和復雜的。

網格蛋白介導的內吞作用

網格蛋白介導的內吞作用（CME）在概念上是一個簡單的過程，包括幾個連續(xù)和部分重疊的步驟。CME可由質膜上的某些受體結構性啟動，或者需要配體和／或抗體結合后啟動。當細胞質中的內吞衣殼蛋白開始聚集在質膜的內小葉上時，CME就開始了。衣殼蛋白通過從細胞質中招募并與額外的蛋白質適配器相互作用而繼續(xù)組裝和生長。關鍵的銜接蛋白使膜彎曲，從而將內化受體／配體集中到一個“網格蛋白包被坑”（CCP）中。由于CCP內陷增大，CCP頸縮窄時，通過一個斷裂過程與質膜分離。肌動蛋白聚合有助于將CCP向內拉入細胞質，直到斷裂完成，CCP釋放并成為一個網格蛋白包被的囊泡（CCV）。最后，CCV外殼被分解，CCV與內涵體融合以運輸?shù)教囟ǖ膩喖毎�位置，或者可以被回收回細胞表面�? 

網格蛋白是CME的關鍵成分，由重鏈和輕鏈組成。三個網格蛋白重鏈和輕鏈形成一個三聚體，它與其他三聚體相互作用，并在新興的CCP周圍形成一個多邊形晶格。銜接蛋白2（AP－2）是一種異源四聚體復合物，它介導CCP頸部的收縮。Dynamin是一種GTP酶，在成熟囊泡的頸部形成螺旋狀聚合物。GTP水解后，dynamin誘導囊泡從質膜分裂。

小窩介導的內吞作用

不依賴于網格蛋白的內吞作用包括小窩介導的內吞作用、小窩蛋白非依賴性載體蛋白／GPI－富集的早期內區(qū)室（CLIC／GEEC）和巨胞飲作用。

小窩是質膜的小瓶狀內陷，其特征是高水平的膽固醇和鞘糖脂，通過不依賴于網格蛋白的途徑介導內吞作用，并且存在于大多數(shù)細胞類型中。小窩的主要支架蛋白是小窩蛋白，它是形成寡聚體的20–24 kDa完整膜蛋白。小窩蛋白共享共同的支架結構域，這些支架結構域介導與自身和其他包含小窩蛋白結合結構域蛋白質的相互作用。

雖然小窩具有類似CCPs的內陷形態(tài)，但它們是不同的。簡單地說，CCP的密度是恒定的，而小窩的密度會因細胞類型的不同而變化很大。CCPs隨著萌發(fā)的內體成熟而增大，相比之下，小窩囊泡保持不變的大小。一旦進入細胞內，小窩就形成了高階結構，而不是由CCPs形成的簡單的球形內體。

小窩蛋白介導的內吞作用的另一個獨特方面是，只有約1％的小窩是從質膜上萌發(fā)的。在一小部分內化的小窩中，它似乎遵循一條與Rab5（早期內胚體的標志物）共定位的循環(huán)途徑。這可能對以利用小窩蛋白介導內吞作用的受體為靶點的ADC帶來挑戰(zhàn)。

CLIC／GEEC內吞作用

CLIC／GEEC是一種內吞室，主要發(fā)生在配體激活的細胞中，這可能由生長因子、抗體的受體交聯(lián)或細菌毒素和病毒引起。此外，細胞膜必須處于高流動性狀態(tài)，因為CLIC／GEEC在低于生理溫度或膜處于更高張力的情況下不起作用。

CLIC在遷移細胞的前緣增加。識別CLIC／GEEC途徑的其他相關參數(shù)包括動力非依賴性質膜斷裂、對膽固醇消耗的敏感性、Rab5／與早期內體融合的獲得、胎盤堿性磷酸酶（PLAP）和與FAK相關的GTPase調節(jié)因子（GRAF1）。